间充质干细胞因其独特的生物特性，使其成为干细胞移植或组织再生领域的理想种子细胞。近年来干细胞产业蓬勃发展，而以间充质干细胞为基础的临床前研究正紧锣密鼓地开展，尤其是骨髓间充质干细胞，因此本文介绍如何高效地从骨髓中分离培养得到间充质干细胞。
大鼠骨髓来源的间充质干细胞形态图1.实验准备
实验所需4%水合氯醛，成年SD大鼠，剪刀镊子等，冷的消毒酒精，完全培养基，冰袋，培养瓶等细胞培养耗材等。
2.取股骨和胫骨
大鼠麻醉后，颈椎脱臼处死，酒精表面在大鼠身体消毒。剪刀剪去毛发，剪开后肢皮肤和肌肉，连带肌肉和股骨胫骨一起分离，放入冷的消毒酒精中，转移到超净台进行肌肉分离。在剪下股骨胫骨时应在关节处剪断，不要将骨头破坏，以免污染。镊子配合眼科剪进行肌肉分离，肌肉分离过程尽量迅速，并在冰上操作。分离的股骨和胫骨放入冷的PBS液中，剪刀剪断股骨胫骨两头，暴露骨髓腔。放入完全培养基中。
3.骨髓分离和细胞接种
5毫升注射器吹吸骨髓腔，反复吹吸3-5次，直到骨髓腔发白为止，此时换用移液管继续吹打，直到培养基中骨髓完全吹散位置。70微米细胞筛网过滤碎渣，接种到培养瓶中培养。基本上这时大部分可见的都是血细胞，也可以在分离后用红细胞裂解液处理。也可以直接悬液接种，但是隔天要换液以除去血细胞，换液过程要轻柔，否则震荡会使皿底的间充质干细胞混悬到血细胞中。换液2-3次后，血细胞基本就没有了，剩余的贴壁细胞大部分就是间充质干细胞。一般情况下3-5天就可以在显微镜下观察到有长梭形细胞爬出，当然也会有少量的免疫细胞，如不成熟的树突状细胞等。这些细胞会随着细胞培养进程慢慢被淘汰，可能是细胞生长的环境不利于这些免疫细胞存活，也可能是换液被换走了。
按照全骨髓法培养的间充质干细胞传代到第三代左右，细胞纯度就比较高了，可以进行相应的细胞成骨成脂分化鉴定，细胞表面分子流式或者免疫荧光鉴定。